2. Значение гистологии для подготовки медицинских лабораторных техников

Практические занятия по гистологии состоят из двух частей – теоретической и практической. Теоретическая часть позволяет студентам узнать особенности развития, строения и функции клеток, тканей, органов, а также их взаимодействие с другими органами в норме. Практическая часть позволяет освоить строение макроскопических и микроскопических структур, чтобы опознавать их внешний вид при различных окрасках, при сравнении одноименных органов человека и лабораторных животных. Кроме того, студенты получают возможность ознакомиться с микроскопической техникой, освоить правила пользования микроскопом МИКмед-5 в проходящем свете при увеличении х 100 и х 400, и санным микротомом, научиться технике приготовления гистологических препаратов.

3. Методы исследования в гистологии, их значение для медицинской практики

Для изучения клеток и тканей под микроскопом изготавливают гистологические препараты. Основными методами исследования гистологических объектов являются световая и электронная микроскопия, которые широко используются в клинической и экспериментальной практике.

Светооптические микроскопы. Основная оптическая часть микроскопа состоит из объектива и окуляра. Объектив является наиболее ответственной оптической системой, дающей увеличенное изображение предмета. Окуляр – оптическая система, которая служит в качестве лупы при визуальном наблюдении увеличенного изображения предмета, даваемого объективом. Окуляр обычно увеличивает изображение в 5 – 25 раз.

Электронная микроскопия. Электронные микроскопы обладают высокой разрешающей способностью. Другими словами, в электронном микроскопе теоретически возможно повышение разрешающей способности и соответственно увеличение изображения в 150000 раз больше по сравнению со световым микроскопом. Наиболее часто в морфологических исследованиях используются просвечивающие электронные микроскопы, позволяющие получить плоскостное изображение изучаемого объекта. В последние годы активно применяются растровые (сканирующие) электронные микроскопы, способные создавать трехмерные изображение, т.е. получать пространственное изображение структур.

Изучение организма на тканевом и клеточном уровнях требует приготовления гистологических препаратов и их рассмотрения под микроскопом. Цель приготовления гистологического препарата заключается в том, чтобы путем обработки привести исследуемый материал в удобное для изучения под микроскопом состояние, сделать его прозрачным и контрастным.

Чтобы сделать препарат контрастнее и получить возможность хорошо различать отдельные его детали, объект подвергают окрашиванию. При этом пользуются тем, что разные структуры тканей и клеток по-разному реагируют на тот или иной краситель.

Изготовление постоянных препаратов требует довольно большой затраты труден времени, такие препараты можно использовать в течение многих лет. Препараты готовят из небольших целых объектов (тотальные препараты) или срезов; при всех условиях объект или срез должен быть тонким и прозрачным, иначе невозможно его изучение под микроскопом. Изготовление препарата состоит из нескольких этапов.

4. Задачи, структура гистологической лаборатории

Гистологическая (патоморфологическая) лаборатория размещается в типовом или специально приспособленном помещении. Она должна быть оснащена необходимыми оборудованием, инструментами, лабораторной посудой и химическими реактивами. Рабочие помещения лаборатории – комната, в которой производят вырезку секционного, биопсийного или экспериментального материала; рабочая комната лаборантов; комната для размещения аппаратуры и моечная. Рабочие помещения должны быть оснащены приточно-вытяжной вентиляцией. В лаборатории необходимо строго соблюдать правила противопожарной безопасности и работы с летучими и токсичными веществами. В рабочей комнате лаборанта должны быть вытяжной шкаф, химический и физический столы, шкаф и сейф для хранения химических реактивов. Лабораторная мебель, выполненная из древесины, малопригодна для работы со многими токсичными веществами, используемыми в патоморфологии, поскольку затруднена ее последующая санитарная обработка, поэтому предпочтение следует отдавать специальной лабораторной мебели из металла и пластика, которая снабжена выдвижными частями, подводкой воды, вакуума, воздуха и газа. Рабочий стул должен иметь регулируемую высоту сиденья и спинки и легко перемещаться по полу.

Перечень необходимого оборудования лаборатории включает технические и аналитические весы, рН-метр, микротомы (санные, ротационные, замораживающие), криостат или криокит, водяную баню, столик для расплавления парафиновых срезов, комплекты автоматических пипеток, термостаты, холодильники, микроскопы, автоматы для проводки материала.

Теоретическое занятие 2. Оборудование гистологической лаборатории

Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №2

Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №2

Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №2

1. Организация рабочего пространства гистологов

Организация рабочего места во многом определяет эффективность и качество работы лаборанта. Рациональная расстановка и размещение лабораторной посуды, инструментария, необходимых растворов и реактивов позволяют без суеты, с наименьшей затратой усилий выполнить за одно и то же время больший объем работы.

У лаборанта должно быть свое рабочее место, с площадью рабочей поверхности не менее 60 х 120 см. Участок стола, предназначенный для непосредственной работы, следует сделать из влагоустойчивого материала, накрыть стеклом и расположить под ним небольшие листы белой и черной бумаги. Это создает соответствующий фон, который облегчает работу с окрашенными (белый лист) и неокрашенными (черный лист) препаратами.

Достаточная освещенность рабочего места является одним из важнейших условий, так как изготовление гистологических препаратов требует значительного напряжения зрения. Необходимо максимально использовать дневной свет. Лучше ставить стол около окна. Однако даже при достаточном свете рабочее место должно быть оснащено специальным осветителем к микроскопу или настольной лампой (с наклоняющейся верхней частью) для обеспечения освещенности. Недостаток света неблагоприятно сказывается на восприятии цвета препарата и затрудняет оценку качества его окраски.

Лаборант должен содержать, свой стол в надлежащем порядке: не загромождать рабочую поверхность лишней посудой и предметами, не применяемыми в данный момент в работе. В любой гистологической лаборатории применяют большой набор разнообразной лабораторной посуды. Следует принять за правило не оставлять использованную посуду длительное время без промывания. Если нет возможности ее тут же окончательно вымыть, то необходимо ополоснуть и залить водой. Для удаления засохших реактивов требуется значительно больше усилий, а иногда их вовсе невозможно отмыть.

В повседневной работе лаборанту необходимо иметь набор инструментов, за которым необходим тщательный уход. После применения его следует сразу же мыть (если нужно, очищать) и насухо вытирать (или высушивать в сушильном шкафу).

Хранить инструменты следует в определенном месте. Это облегчает их нахождение и экономит рабочее время.

По окончании рабочего дня лаборант обязан проверить, выключены ли электроприборы, с которыми он работал.

2. Виды лабораторной посуды и инструментов

Лабораторная посуда:

1. Банка на штативе с отводной трубкой для дистиллированной воды.

2. Широкогорлые банки с притертыми пробками для составления батарей для проводки материала, для хранения кусочков тканей в фиксирующих жидкостях и т. д.

3. Бюксы – круглые стеклянные стаканчики с притертыми крышками. Применяются для обработки гистологических срезов и маленьких кусочков тканей.

4. Биологические стаканчики – круглые, овальные или четырехугольные, снабжены крышечками. Наборы таких стаканчиков вставляются в специальные штативы и используются в качестве батарей для проводки гистологических срезов, монтированных на предметных стеклах.

5. Колбы (плоскодонные) – в зависимости от емкости используются для приготовления и хранения различных красителей, под дистиллированную воду и др.

6. Чашки Петри – широкие плоские стеклянные чашки с крышками, используются для окраски свободно плавающих срезов.

7. Кюветы – применяют для одновременной окраски нескольких срезов.

8. Кристаллизаторы – для мытья посуды.

9. Часовые стекла – для окрашивания свободно плавающих срезов, нуждающихся в контроле под микроскопом (серебрение нервной ткани).

10. Пипетки – используют для накапывания красителей на срезы.

11. Для хранения канадского бальзама может быть приспособлена любая баночка, в пробку которой воткнута стеклянная палочка.

12. Предметные стекла – прямоугольные стеклянные пластины размером 76 х 26 мм и толщиной 1 мм, предназначенные для размещения гистологических срезов.

13. Покровные стекла – тонкие (0,15 – 0,2 мм) пластинки для покрытия обработанных срезов, расположенных на предметном стекле.

14. Вся используемая лабораторная посуда должна быть снабжена этикетками и рационально размещена, что позволяет избежать ошибок при ее применении.

3. Виды гистологического оборудования (микротомы, гистологический автомат, прибор для окраски препаратов, станция для заливки в парафин, криостат, дополнительное оборудование)

В набор используемых в гистологической лаборатории инструментов входят пинцеты (хирургические, анатомические и глазные), ножницы (анатомические, хирургические и глазные), скальпели, препаровальные иглы, шпатели – прямые и изогнутые металлические лопатки (чаще применяют при приготовлении срезов на замораживающем микротоме и целлоидиновых срезов), хирургические ножи для вырезки материала и ножи с двойным лезвием для получения тонких срезов ткани мозга.

Теоретическое занятие 3. Строение клетки

Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №3

Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №3

1. Учение о клетке

Клетки – это функциональные и структурные единицы живых организмов.

Организм человека насчитывает приблизительно 10¹⁴ клеток. К клеткам живых организмов предъявляется много требований. Пример: клетки должны быть маленькими по размеру (от 6 до 100 мкм). Для того чтобы скорость проходящих импульсов не имитировалась скоростью диффузий реагирующих веществ. Для клеток ткани характерен единый: обмен веществ; особенность строения; определенные функции.

Каждая клетка многоклеточного организма связана с другими клетками. Клетка способна поглощать энергию, осуществлять синтез, воспроизводиться, сокращаться, раздражаться и т. д. Между клеткой и окружающей ее средой происходит постоянный обмен веществ.

Оболочка клетки имеет 2 слоя:

1. Внешний слой, состоящий из полисахаридов, у растений он толстый и называется клеточная стенка; у животных это слой тонкий и называется гликокаликс.

2. Это плазматическая мембрана. Имеет мозаичное строение, состоит из двух слоев фосфолипидов, между которыми, мозаично располагаются белки. Белки часто подвижны, а фосфолипиды имеют 2 части: внешняя часть – гидрофобная, а внутренняя – гидрофильная.

Специальные органеллы.

Обеспечивают специфичность функций клетки. В мышечных клетках это миофибриллы (от лат. mio – мышца, fibrila – спец. органелла), за счет которой мышечная клетка сокращается. В нервных клетках нейрофибрилла, которая обеспечивает чувствительность цитоплазмы. В эпителиальных клетках – тонофибриллы, обеспечивает прочность клетки.

2. Клеточная теория

Ядро растительной клетки наблюдал также английский ботаник Роберт Броун (1773—1858) в 1831 г. Он же открыл «броуновское движение». Ядро —nucleus (лат.), karyon (греч. – ядро ореха). Эти работы послужили основой для создания клеточной теории. Ее сформулировали в 1838—1839 гг. немецкие ученые ботаник Матиас Шлейден (1804—1881) и физиолог, гистолог Теодор Шванн (1810—1882).

Основные положения ее:

1. Все организмы – и растительные, и животные – состоят из клеток; клетка – главная структурная единица живых организмов.

2. В основе роста живых организмов лежат размножение и рост клеток.